（一）標本的采集及處理

標本的采集和預處理：用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細胞。標本核酸的提取，按1體積細胞懸液加10倍體積的細胞裂解液37℃下處理過夜；

（二）PCR擴增

1、 引物設計和合成：HPV基因組可分為早期區(qū)（E）和晚期區(qū)（L），每區(qū)含一系列開放讀碼框架（ORF）。

2、PCR反應試劑：Taq DNA聚合酶（2U/ml）、10mmol/L dNTP貯備液，10×PCR緩沖液，100μmol/L MY11和MY09貯備液，滅菌的玻璃蒸餾器制備的蒸餾水。

3、PCR擴增方法和程序：以100μl PCR反應液，用無菌0.5ml硅化塑料離心管為反應管進行擴增反應。

（三）擴增產物的檢測和分析

1、凝膠電泳：擴增反應結束后，取出反應管，冷卻至室溫，取10μl擴增產物用5%-7%聚丙烯酰胺凝膠或1.5%瓊脂糖電泳，溴化乙錠染色，紫外分析儀下分析結果，分子量約為450bp處出現(xiàn)明顯的DNA帶。

2、核酸雜交：如果凝膠電泳無清楚的DNA或需確定DNA帶的特異性時，可用標記的公用混合探針和（或）型特異探針作Southern吸印雜交、斑點雜交驗證。

用PCR方法檢測HPV比核酸雜交方法優(yōu)越。其敏感性高，GP-PCR方法以凝膠電泳直接分析結果，可檢出標本中200個拷貝的HPV DNA，若以核酸雜交檢測PCR產物，敏感性提高，能檢出10個拷貝的HPV DNA。

鑒于PCR技術的高度敏感性，以生殖道脫落細胞為檢材足以滿足試驗要求，避免了活檢取材、研磨組織繁雜操作。一般情況下，PCR擴增產物經凝膠電泳，觀察產生的DNA可直接作出診斷。因此，PCR技術檢測HPV實驗周期短、簡便快速。